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還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）含量測定試劑盒說明書

還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒?產(chǎn)品簡介：

GSH/GSSG是細(xì)胞內(nèi)重要的氧化還原對之一。因此，測定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。

DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度變化與GSH含量成正比。

還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒?試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1ml比色皿、雙蒸水

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一×1支，充分溶解于50ml雙蒸水，4℃保存

試劑二×1支，充分溶解于50ml雙蒸水中，4℃保存

試劑三×1支，充分溶解于10ml雙蒸水中，4℃避光保存

還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒?操作步驟：

一、樣品前處理 ：   

取組織約0.1g，加1ml試劑二，冰上充分研磨，8000rpm 4℃離心10min，取上清。（如上清不清澈，再離心3min）

GSH測定操作：

測定前將試劑一于25℃水浴20min

按每100mg組織加入1000µL生理鹽水的比例進(jìn)行勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。   

對于非哺乳動物組織：按每100mg組織加入1000µL提取液的比例進(jìn)行勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

（2）血清（漿）樣品：直接檢測。

二、測定操作表：

迅速混勻，于412nm測吸光值，并記錄第60s的OD值

GSH含量計(jì)算：

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=0.0015x+0.0818（x為GSH濃度，y為吸光值）

液體中GSH（μmol/L）=[（OD測定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×樣品稀釋倍數(shù)

組織中GSH計(jì)算：

①GSH（μmol/mg prot）=[（OD測定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×樣品稀釋倍數(shù)÷樣品蛋白濃度（Cpr）

②GSH（μmol/g mass）=[（OD測定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×樣品稀釋倍數(shù)÷樣品質(zhì)量（g）

注意事項(xiàng)：

（1）樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測定酶活力，以免影響其活力測定時(shí)，除試劑一外，其它試劑均需放置在冰上；

（2）樣本測定前先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如吸光值太高（超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，即y＞0.2時(shí)），應(yīng)先用試劑二稀釋到適當(dāng)倍數(shù)，使得吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

(3)處理后樣品不能用于蛋白濃度測定