產品名稱：生化法 輔酶ⅠNAD（H）含量檢測試劑盒
產品型號：BC0315
產品報價：
產品特點：生化法 輔酶ⅠNAD（H）含量檢測試劑盒測定意義：輔酶ⅠNAD（H）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NAD是糖酵解和TCA循環的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD（H）含量和NADH/NAD比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環
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生化法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測試劑盒
產品規格：100管/48樣 產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存； 參考價格：1180
庫存狀態：現貨
關鍵字：輔酶ⅠNAD(H)試劑盒|含量檢測試劑盒|輔酶ⅠNAD(H)含量檢測|微量法
簡要介紹：
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外，NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。
產品詳細描述
| 商品貨號： | 商品品牌： | 規格 | 基本售價： | 選擇規格 |
| BC0315-100管/48樣 | Solarbio | 100管/48樣 | 1180.00元 |  |
產品內容：
酸性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；
堿性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 1.5mL×1 支，4℃保存
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 1.6mL 雙蒸水，混勻，4℃保存一周；
試劑四：粉劑×1 支，4 ℃保存，用時加入 1.9mL 雙蒸水，混勻，4℃保存一周；
試劑五：液體 0.7mL×1 支，4 ℃保存；
試劑六：液體 10mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑七：自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。
NAD 標準品：粉劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標準溶液備用。
NADH 標準品：粉劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標準溶液備用。
操作步驟：
一、NAD+和 NADH 的提?。?/span>
1、血清（漿）中 NAD+和 NADH 的提取：
NAD+的提?。喝?0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min；取上清 200uL，加入等體積堿性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清，冰上保存待測。
NADH 的提?。喝?0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 堿性提取液，煮沸 5min(蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。
2、組織中 NAD+和 NADH 的提取：
NAD+的提取：稱取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積堿性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。
NADH 的提?。悍Q取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 堿性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。
3、細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提?。?/span>
NAD+的提?。菏占?500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取：收集 500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 堿性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。
二、測定步驟：
1、可見分光光度計/酶標儀調節波長570nm，蒸餾水調零。
2、 操作表（在1.5ml棕色EP管中按下表依次加樣）
| 試劑名稱 | 對照管(µL) | 測定管(µL) | NAD 或 NADH 標準管 | 空白管 |
| 上清液 | 10 | 10 | ||
| 標準溶液 | 10 | |||
| 蒸餾水 | 10 | |||
| 試劑六 | 100 | |||
| 試劑一 | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 試劑二 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| 試劑三 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| 試劑四 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| 試劑五 | 7 | 7 | 7 | 7 |
| 充分混勻，室溫避光靜置20min | ||||
| 試劑六 | 20 | 20 | 20 | |
| 充分混勻，靜置5min后，15000rpm，25℃離心15min，棄上清，沉淀中加入： | ||||
| 試劑七 | 200 | 200 | 200 | 200 |
混勻， 570nm 下比色，讀取吸光值ΔA 測定=A 測定管-A 對照管，NAD 標準管的記為ΔA 標準 1=A 標準管 1-A 空白管。 NADH 標準管的記為ΔA 標準 2=A 標準管 2-A 空白管?？瞻坠苤恍枳鲆?到兩次。
注意事項：
1、操作過程應避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加，必須分開加。
2、反應過程要注意避光。
3、當吸光值大于 1 時，建議稀釋后測量，計算公式中應當乘以稀釋倍數。
NAD+含量的計算
NAD+含量(nmol/mL）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 1÷C 標）×V 提取÷V 血清=12.5×ΔA 測定÷ΔA 標準 1
2、組織、細菌、細胞中 NAD+含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
NAD+ (nmol/mg prot）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 1÷C 標）×V 提取÷(V 提取×Cpr) = 1.25×ΔA 測定÷ΔA 標準 1
(2)按樣本鮮重計算
NAD+ (nmol/g 鮮重）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 1÷C 標）×V 提取÷W= 1.25×ΔA 測定÷ΔA 標準 1÷W
(3)按細菌或細胞密度計算
NAD+ (nmol/10 4cell）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 1÷C 標）×V 提取÷500=0.0025×ΔA 測定÷ΔA 標準 1
NADH 含量的計算
NADH 含量(nmol/mL）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 2÷C 標）×V 提取÷V 血清 =12.5×ΔA 測定÷ΔA 標準 2
2、組織中 NADH 含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
NADH (nmol/mg prot）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 2÷C 標）×V 提取÷(V 樣品×Cpr) = 1.25×ΔA 測定÷ΔA 標準 2
(2)按樣本鮮重計算
NADH (nmol/g 鮮重）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 2÷C 標）×V 提取÷W=1.25×ΔA 測定÷ΔA 標準 2÷W
(3)按細菌或細胞密度計算
NADH (nmol/10 4cell）=ΔA 測定÷（ΔA 標準 2÷C 標）×V 提取÷500=0.0025×ΔA 測定÷ΔA 標準 2 C 標：NAD 或 NADH 標準溶液的濃度，1.25nmol/mL；V 提?。杭尤胩崛∫嚎傮w積，1mL；V 血清：提取時加入的血清體積，0.1mL；W：樣本鮮重，g；500：500 萬個細胞。
生化法 輔酶ⅠNAD(H)含量檢測試劑盒
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